SYPRO Orange ist ein Fluoreszenzfarbstoff vom Merocyanin-Typ, der im Zuge einer Proteincharakterisierung zur Proteinfärbung verwendet wird, meistens in einer SDS-PAGE.

Eigenschaften

SYPRO Orange bindet wie auch sein Analogon SYPRO Red selektiv an Proteine über 6,5 Kilodalton (auch Glykoproteine) in SDS-Micellen, nicht jedoch an DNA oder Lipopolysaccharide. SYPRO Orange ist gemäß Verordnung (EG) Nr. 1272/2008 (CLP) nicht als gefährlich eingestuft, da seine Toxizität und Mutagenität aufgrund der geringen Produktionsmenge unbekannt ist. Das Absorptionsmaximum liegt bei λ = 470 nm, die Emission ist bei λ = 569 nm maximal. Die Sensitivität bei SDS-PA-Gelen liegt mit SYPRO Orange bei etwa 4–8 ng Protein, also etwas schlechter als bei der Silberfärbung. Aufgrund der Fluoreszenz besitzt die SYPRO Orange-Färbung bei einer Mengenabschätzung im Vergleich zur Silberfärbung oder Coomassie einen größeren linearen dynamischen Bereich, d. h. eine bessere Korrelation zwischen der Proteinmenge und der Signalintensität. SYPRO Orange eignet sich nicht zur Färbung von Proteinen auf Western Blots, 2D-Gelen oder IEF-Gelen. Im Gegensatz zur Silber- und Coomassie-Färbung werden zur Fixierung vor einer Färbung zwar auch Essigsäure, aber keine Alkohole wie Methanol oder Ethanol verwendet, da SYPRO Orange zur Färbung auf die Anwesenheit von SDS angewiesen ist. SYPRO Orange wird als 10 mM Lösung in Dimethylsulfoxid geliefert.

Einzelnachweise

  1. 1 2 3 Aleksandr Petrovich Demchenko: Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology III: Applications in Sensing and Imaging Band 3 von Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology. Springer 2011. ISBN 9783642180354. S. 179ff.
  2. 1 2 Patent EP0774122B1: Protein-Färbung mittels Merocyanin Farbstoffe. Angemeldet am 20. Mai 1996, veröffentlicht am 19. August 2009, Anmelder: Molecular Probes Inc, Erfinder: Richard P. Haugland et al.‌
  3. ↑ T. Kroeger, B. Frieg, T. Zhang, F. K. Hansen, A. Marmann, P. Proksch, L. Nagel-Steger, G. Groth, S. H. Smits, H. Gohlke: EDTA aggregates induce SYPRO orange-based fluorescence in thermal shift assay. In: PLOS ONE. Band 12, Nummer 5, 2017, S. e0177024, doi:10.1371/journal.pone.0177024, PMID 28472107, PMC 5417642 (freier Volltext).
  4. ↑ T. H. Steinberg, L. J. Jones, R. P. Haugland, V. L. Singer: SYPRO orange and SYPRO red protein gel stains: one-step fluorescent staining of denaturing gels for detection of nanogram levels of protein. In: Analytical biochemistry. Band 239, Nummer 2, August 1996, S. 223–237, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1996.0319. PMID 8811914.
  5. ↑ S. Gallagher, D. Chakavarti: Staining proteins in gels. In: Journal of visualized experiments : JoVE. Nummer 17, 2008, S. , ISSN 1940-087X. doi:10.3791/760. PMID 19066521. PMC 3253607 (freier Volltext).
  6. 1 2 3 4 5 Datenblatt SYPRO Orange Protein Gel Stain bei Sigma-Aldrich, abgerufen am 28. November 2013 (PDF).
  7. ↑ T. H. Steinberg, R. P. Haugland, V. L. Singer: Applications of SYPRO orange and SYPRO red protein gel stains. In: Analytical biochemistry. Band 239, Nummer 2, August 1996, S. 238–245, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1996.0320. PMID 8811917.
  8. ↑ Harvey, P. H. & Pagel, M. D. The comparative method in evolutionary biology. Oxford University Press, Oxford (1991).
  9. 1 2 Molecular Probes / Life Technologies: SYPRO Orange and SYPRO Red Protein Gel Stains. 2003. PDF.
  10. ↑ T. H. Steinberg: Protein gel staining methods: an introduction and overview. In: Methods in enzymology. Band 463, 2009, S. 541–563, doi:10.1016/S0076-6879(09)63031-7, PMID 19892191.
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.